培養(yǎng)細胞的具體常規(guī)觀察

培養(yǎng)細胞的常規(guī)觀察

細胞接種或傳代以后，實驗者每天或至多間隔1～2d，要對細胞做常規(guī)性檢查。觀察細胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細胞動態(tài)變化，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應及時采取措施。   

1. 細胞形態(tài) 生長狀態(tài)良好的細胞，在一般顯微鏡下觀察時可見，細胞透明度大、折光性強、輪廓不清。細胞生長不良時，輪廓增強，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細胞之間空隙加大，細胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點，如上皮細胞變成類上皮細胞等。某些染料當細胞死亡時能透過變性的胞膜與解體的細胞核DNA結(jié)合，而令其著色。因而常用臺盼藍(trypan blue) 鑒別細胞死活，活細胞不著色，死細胞核呈藍色。

2. 細胞生長 初代培養(yǎng)或傳代的細胞懸液接種以后，經(jīng)過長短不同的潛伏期后開始增殖。傳代細胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細胞生長，一周內(nèi)便可連接成片。接種細胞長滿瓶壁后，應及時做再培養(yǎng)。否則由于營養(yǎng)物消耗和代謝積累，細胞即進入停止期或退化期。此時細胞輪廓增強，細胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物，為膨脹的線粒體，細胞質(zhì)呈空泡化，細胞變圓、粗糙，嚴重時細胞從瓶壁脫落，只有及時再做傳代處理，才能使細胞繼續(xù)生長繁殖。

3. 營養(yǎng)液 正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細胞維持在pH6.5～6.6條件下，細胞會脫落死亡。當培養(yǎng)液酸化變黃時，說明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對穩(wěn)定。更換營養(yǎng)液的時間，可依營養(yǎng)物的消耗而定，細胞生長旺盛時2～3d換一次，生長緩慢時，3～4d亦可。要特別注意各種細胞對pH值要求是不一樣的。

4. 微    生物    污染 微    生物    污染培養(yǎng)    細胞培養(yǎng) 物后會出現(xiàn)pH值改變，培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細菌感染后，由于細菌的運動，光鏡觀察可見有微閃光；真菌感染則在鏡下見許多細絲狀菌絲，有時還密集有群集孢子；支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。細胞污染以后一般應當廢棄，對于重要的細胞株，可以參考相關專著，介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實驗、珍貴的細胞，至少由兩個實驗人員獨立培養(yǎng)操作，或由一個人分次(不同時)操作。除培養(yǎng)實驗室的衛(wèi)生條件外，空氣中的濕度與微生物污染關系密切。重要的、周期長的實驗盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進行。