人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理

PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理：

       您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)，或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。

       1.收到細(xì)胞，*時(shí)間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時(shí)貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會(huì)發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí)，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí)，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下，會(huì)調(diào)整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右，才能重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)生長期的狀態(tài)，在對(duì)數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。

       3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí)，則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對(duì)于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對(duì)于生長較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞，*次處理也可以依照第二種情況。