人正常肝細胞；L-02細胞凍存操作

人正常肝細胞；L-02細胞凍存操作:

凍存液配方: 無血清凍存液,液氮儲存

細胞密度 :待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

凍存方法: a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項 :凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案

收到后處理:

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基)