ELISA實驗中稀釋液選擇指南

稀釋液選擇確實是ELISA實驗的“隱形基石”，選對了能讓標準曲線更平滑、樣本檢測更穩定。核心原則是匹配樣本基質特性+維持抗原抗體活性，既要減少非特異性結合，又要確保目標分子穩定。

??? 稀釋液核心成分與功能設計

1. 基礎緩沖體系：維持pH與離子強度

Tris-HCl緩沖液（pH 7.4-8.0）

? 優勢：對酶活性影響小，適用于HRP、ALP標記的ELISA

? 配方：50mM Tris + 150mM NaCl，用HCl調節pH至7.4

? 禁忌：檢測酸性敏感抗原（如某些細胞因子）時避免使用

PBS緩沖液（pH 7.2-7.4）

? 優勢：生理滲透壓，模擬體內環境，適合抗體、血清樣本

? 配方：137mM NaCl + 2.7mM KCl + 10mM Na?HPO? + 1.8mM KH?PO?

? 變種：含0.05% Tween-20的PBST，增強洗滌效果

?? 樣本類型專屬稀釋液配方

1. 血清/血漿樣本

基礎配方：PBS + 0.5% BSA + 0.05% Tween-20 + 0.01% NaN?（防腐劑）

特殊處理：

溶血樣本：添加1%血紅蛋白吸附劑（如活性炭）

高脂樣本：4℃ 12000rpm離心10分鐘取上清，用含2% PEG 8000的稀釋液

2. 細胞培養上清/組織勻漿

基礎配方：Tris-HCl（pH 7.5）+ 1% BSA + 0.1% Tween-20 + 5mM EDTA（金屬蛋白酶抑制劑）

優化策略：

貼壁細胞上清：添加0.5% FBS（模擬培養環境）

腫瘤組織勻漿：含1mM PMSF（蛋白酶抑制劑）+ 10μg/mL aprotinin

3. 小分子物質（激素、藥物、毒素）

基礎配方：PBS + 0.1% BSA + 0.1% gelatin + 5% DMSO（助溶脂溶性分子）

?? 常見錯誤與避坑指南

1. 稀釋液污染風險

微生物污染：4℃儲存不超過2周，添加0.01% NaN?（終濃度），但HRP標記實驗禁用NaN?（抑制酶活性）

交叉污染：標準品稀釋液與樣本稀釋液分開配制，使用不同顏色離心管區分。

通過精準匹配樣本特性與稀釋液成分，可使ELISA實驗的變異系數（CV）從15%降至8%以下，尤其對低濃度樣本（如pg級細胞因子）的檢測靈敏度提升2-3倍。記住：沒有“萬能稀釋液”，只有“定制化方案”——根據抗原性質、樣本基質和檢測體系靈活調整，才能獲得穩定可靠的數據。