幾項常用細胞固定劑及其優(yōu)缺點比較

常用細胞固定劑及其優(yōu)缺點比較

1、95%酒精：最常用的細胞學固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，經(jīng)95%酒精固定的涂片，染色前沒有必要經(jīng)過水洗。此固定液適用于蘇木素-伊紅染色和巴氏染色。固定時間根據(jù)標本的不同，時間也不盡相同，一般標本固定時間為15-30分鐘，痰標本需要更長一些時間。經(jīng)過95%酒精固定的標本，細胞核保存較好，結(jié)構(gòu)清晰，顏色鮮艷。如果在95%酒jing液內(nèi)加入聚乙二醇更佳，可以保護細胞免受空氣干燥后的人工假象。

2、乙mi酒jing液（1：1）：其效果與95%酒精相似，但由于乙mi有很強的吸水性和特有的刺激性氣味，容易揮發(fā)，長期低濃度吸入，有頭痛、頭暈、疲倦、嗜睡、蛋白尿、紅細胞增多等不良反應(yīng)。長期皮膚接觸，可發(fā)生皮膚干燥、皸裂。所以現(xiàn)在已經(jīng)逐漸被95%酒精所代替。

3、冰醋酸：5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。滲透性強，固定快，能使紅細胞膨脹而破碎，常與其它液體配合使用。

4、甲醇：固定時間快，細胞收縮小，細胞核保存較好，結(jié)構(gòu)清晰，染色鮮艷。常作為穿刺細胞涂片的固定液。對抗原保存較好，可作為細胞涂片免疫組化的固定液。缺點是具有揮發(fā)性和毒性，大量接觸與吸入對中樞神經(jīng)有一定的傷害。甲醇的毒性與其代謝產(chǎn)物甲醛和甲酸的蓄積有關(guān)。以前認為毒性作用主要為甲醛所致,?甲醛能抑制視網(wǎng)膜的氧化磷酸化過程, 使膜內(nèi)不能合成ATP,細胞發(fā)生變性,最后引起視神經(jīng)wei縮。近年研究表明,甲醛很快代謝成甲酸,急性中毒引起的代謝性酸中毒和眼部損害，主要與甲酸含量相關(guān)。

5、無水酒精：?對糖原保存較好，容易使細胞收縮，其性能與95%酒精相似，很少單獨使用，一般只用于糖原的固定。

6、丙酮:為易揮發(fā)的無色液體,有刺激性氣體。可使蛋白質(zhì)沉淀,滲透性強,細胞收縮嚴重,對核的固定差。很少用于常規(guī)細胞學的固定。廣泛用于酶組織化學中的各種酶的固定,也有人用于抗原的保存,作為細胞涂片免疫組化的固定液。丙酮具有揮發(fā)性和毒性,大量接觸與吸入對肝、腎及中樞神經(jīng)有一定的傷害。

7、10%中性緩沖甲醛液:

配方1:40%甲醛10ml,0.01mol/L?pH7.4的PBS90ml。

配方2:40%甲醛120ml,蒸餾水880ml,磷酸二氫鈉(NaH2PO4;H2O)4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)13g。

8、Carnoy?固定液:配方:無水乙醇60ml,氯fang30ml,冰醋酸10ml

Carnoy液能固定胞漿和胞核,尤其適宜于染色體等。常用于糖原及尼氏體的固定,由于冰醋酸能溶解紅細胞并可防止細胞由酒精引起的過渡收縮,對固定有血的標本和顯示DNA、RNA效果很好。缺點是每次固定后固定液內(nèi)有大量的紅細胞碎片和細胞脫落,必須及時過, 否則容易造成污染。其次,氯fang具有揮發(fā)性和毒性,大量接觸與吸入對肝、腎及中樞神經(jīng)有一定的傷害。

10%中性緩沖甲醛液對大多數(shù)抗原保存較好,是免疫組織化學最常用的固定液,組織穿透好,組織收縮較小。但此液體不適合固定濕固定的涂片,可作為干固定涂片和細胞蠟塊的定液。甲醛也具有揮發(fā)性和毒性。大量吸入會出現(xiàn)呼吸道的嚴重刺激和水腫、眼刺痛、頭痛,也可發(fā)生支氣管哮喘。經(jīng)常吸入少量甲醛,能引起慢性中毒, 出現(xiàn)粘膜充血、皮膚刺激癥、過敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等。全身癥狀有頭痛、乏力、胃納差、心悸、失眠、體重減輕以及植物神經(jīng)紊亂等。